ABSTRACT: Intracranial pressure (ICP) monitoring is considered the gold standard for optimizing the treatment of humans in intensive care units. However, this procedure is not commonly performed in veterinary medicine because of the limitations and complications of the method. There are some new promising non-invasive techniques for monitoring ICP, but they have not been validated in veterinary medicine. This study aimed to correlate the non-invasive intracranial pressure (NI-ICP) waveforms obtained with the BCMM-2000 Brain4care monitor during myelography in dogs with myelopathies undergoing this exam for diagnostic purposes with the waveforms obtained through invasive monitoring of the subarachnoid pressure (SP). The NI-ICP waveform was monitored in six dogs with myelopathies before (M1), during (M2), and after (M3) contrast medium injection into the subarachnoid space. Cerebrospinal fluid (CSF) was collected before contrast injection. The SP waveform was simultaneously monitored in three of the six dogs. Correlations between the two methods were performed using Pearson’s coefficient. The analysis of the morphology and amplitude of the waves at each moment was performed, and at M2, an increase in the P2:P1 ratio (p<0.05) was observed in both monitoring methods. In M3, the values were similar to those of M1, demonstrating the return of cerebral compliance. The comparison of the NI-ICP and SP had a positive correlation in those moments (Pearson’s coefficient r=0.76; p=0.027). The speed of contrast administration, degree of spinal cord compression, and volume of CSF previously collected may affect P2:P1 and ICP dynamics. The BCMM-2000 Brain4care monitor was effective in detecting changes in ICP dynamics and abnormal pulse waveforms in dogs with meningoencephalitis of unknown origin, vertebral neoplasm and intervertebral disc disease with and without hemorrhagic myelomalacia, suggesting increased ICP induced by myelography.

RESUMO: A monitorização da pressão intracraniana (PIC) é considerada o padrão ouro para otimizar o tratamento de humanos em unidades de terapia intensiva, entretanto, esse procedimento não é comumente realizado na medicina veterinária devido às limitações e complicações do método. Existem algumas técnicas não invasivas promissoras de monitoramento da PIC, mas elas não foram validadas na medicina veterinária. Este estudo teve como objetivo correlacionar os formatos das ondas não invasivas da PIC (NI-PIC), obtidas com o monitor BCMM-2000 Brain4care, antes e após a injeção de meio de contraste no espaço subaracnóideo de cães com mielopatias submetidos à mielografia para fins diagnósticos, com as formas de onda obtidas por meio de monitoração invasiva da pressão subaracnóidea (PS). O formato das ondas NI-PIC foram monitoradas em seis cães com mielopatias antes (M1), durante (M2) e após (M3) injeção de meio de contraste no espaço subaracnóideo. O líquido cefalorraquidiano (LCR) foi coletado antes da injeção de contraste. A forma da onda da PS foi monitorada simultaneamente em três dos seis cães. As correlações entre os dois métodos foram feitas usando o coeficiente de Pearson. Foi realizada a análise da morfologia e amplitude das ondas em cada momento, e em M2 observou-se aumento da relação P2:P1 (p<0,05) em ambos os métodos de monitoramento. Em M3, os valores foram semelhantes aos de M1, demonstrando o retorno da complacência cerebral. A comparação do NI-PIC e PS apresentou correlação positiva nesses momentos (coeficiente de Pearson r=0,76; p=0,027). A velocidade de administração do contraste, o grau de compressão da medula espinhal e o volume de LCR coletado anteriormente podem afetar a dinâmica P2:P1 e PIC. O monitor BCMM-2000 Brain4care foi eficaz na detecção de alterações na dinâmica da PIC e dos formatos das ondas de pulso anormais em cães com meningoencefalite de origem desconhecida, neoplasia vertebral e doença do disco intervertebral com e sem mielomalácia hemorrágica, sugerindo aumento da PIC induzida pela mielografia.

RESUMO: O gene floR descrito é descrito pela literatura como o responsável pela resistência ao florfenicol, que é um antimicrobiano amplamente utilizado na aquicultura. Esse gene já foi relatado em muitas espécies de bactérias, inclusive no gênero Aeromonas. Essas bactérias causam alta mortalidade na piscicultura trazendo prejuízos econômicos. É importante que haja estudos sobre esse gene e possíveis mutações que possam levar a alterações na estrutura e função da proteína. Os objetivos desse estudo foram caracterizar o gene floR em isolados de Aeromonas spp. obtidas do Vale do São Francisco e verificar se a presença desse gene está associada com a resistência ao florfenicol. Foram realizadas reações em cadeia da polimerase (PCR) para a presença do gene floR em 27 isolados de Aeromonas spp.. Amostras positivas para a presença do gene foram sequenciadas e analisadas quanto à presença de polimorfismos por meio de alinhamentos. Os diferentes haplótipos detectados foram utilizados para análises com os programas SIFT e PolyPhen para predição de alteração de função proteica. A modelagem estrutural da proteina codificada pelo gene floR foi realizada com o programa Modeller e, os modelos foram avaliados pelo Procheck, Verify3D e Whatif. A similaridade da estrutura tridimensional da proteína referência com as estruturas tridimensionais das proteínas codificadas pelos diferentes haplótipos foi comparada através do TM-align. A resistência das bactérias ao florfenicol foi avaliada através do teste de microdiluição em caldo, o qual também foi realizado na presença do carbonil cianeto m-clorofenil hidrazona para verificar o efeito da inibição da bomba de efluxo sobre tal resistência. Dos vinte e sete isolados avaliados quanto a presença do gene floR, 14 isolados foram positivos e 10 foram sequenciados, o que permitiu a identificação de três polimorfismos no gene floR, que levaram a construção de três haplótipos diferentes (TAA, TTA e CTG). As análises realizadas com os programas SIFT e PolyPhen apontaram que os haplótipos TTA e TAA provavelmente poderiam alterar a estrutura e função da proteína. As proteínas modeladas para os três haplótipos demonstraram possuir praticamente a mesma conformação estrutural entre si. Todos os isolados que apresentaram o gene foram resistentes ao florfenicol e aqueles que não apresentavam foram sensíveis. O teste na presença do Carbonil Cianeto m-Clorofenil Hidrazona foi realizado para três isolados, cada isolado representando um haplótipo, sendo possível observar a inibição do crescimento bacteriano em todas as concentrações independente do haplótipo. Os resultados obtidos nesse estudo mostram que a resistência ao flofenicol em Aeromonas spp. pode ser explicada pela presença do gene floR, e que esse gene está relacionado com uma bomba de efluxo. As mutações verificadas no gene floR, parecem não estar envolvidas com alteração de estrutura e função da proteína codificada por esse gene.

ABSTRACT: The floR gene is described in related literature as responsible for resistance to florfenicol, which is a widely used antimicrobial agent in aquaculture. This gene has been reported in many species of bacteria, including the genus Aeromonas. These bacteria cause high mortality in fish farming bringing economic losses. It is important that studies of this gene and possible mutations that can lead to changes in the structure and function of the protein. The aim of this study was to characterize the floR gene in isolates of Aeromonas spp. and check if the presence of this gene is associated with resistance to florfenicol in Aeromonas spp. obtained from the San Francisco Valley. PCR (Polymerase Chain Reaction) were also performed to verify the presence of the floR gene in 27 isolates of Aeromonas spp. Positive samples for the presence of the gene were sequenced and analyzed for the presence of polymorphisms using alignments. Different haplotypes detected were used for analysis with the SIFT and PolyPhen programs for prediction of changes in protein function. The structural modeling of protein encoded by the floR gene was performed using the Modeller software, and the models were evaluated by Procheck, Verify3D and Whatif. The similarity of the dimensional structure of reference protein with the dimensional structures of the proteins encoded by the different haplotypes was compared by TM-align. Bacterial resistance to florfenicol was assessed by the microdilution test, which was also performed in the presence of carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone to verify the effect of inhibiting the efflux pump. 14 isolates were positive for the presence of floR gene and 10 were sequenced and allowed the identification of three polymorphisms in the floR gene, which led to construction of three different haplotypes (TAA TTA and CTG). The analyzes carried out with the SIFT and PolyPhen programs showed that the TTA and TAA haplotypes could probably change the protein structure-function. Proteins modeled for the three haplotypes were found to have substantially the same structural conformation with each other. All isolates presenting the gene were resistant to florfenicol and those who did not have were sensitive. The test in the presence of carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone was conducted for three isolates, representing each single haplotype and was observed inhibition of bacterial growth at all concentrations independent of the haplotype. The results of this study show that resistance to flofenicol in Aeromonas spp. may be explained by the presence of floR gene and that this gene is associated with an efflux pump. Mutations observed in floR gene do not appear to be involved with chenges in structure and function of the protein encoded by gene.